多酚氧化酶測(cè)試盒的粗酶液提取

（多酚氧化酶 Polyphenol Oxidase，PPO ，分光光度測(cè)定法）

一、測(cè)定原理：

多酚氧化酶能夠催化底物酚產(chǎn)生醌，后者在 420nm 處有特

征性光吸收。

二、測(cè)定意義：

PPO 主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種

含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，

與果蔬加工、茶葉品質(zhì)等密切相關(guān)；同時(shí)酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)病原微生物

有抑制和殺傷作用，具有一定的抗病能力。

三、試劑盒組成(50T/24 樣)：

四、自備儀器或用品：

可見(jiàn)光分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、

1cm 光徑比色皿、研缽、蒸餾水、冰。

五、粗酶液提取:

1、組織樣本：組織稱重（g）：提取液體積（mL）為 1:5 或

1:10 的比例（例如取 0.2g 組織，加 1mL 提取液或 0.1g

組織加 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿；8000 轉(zhuǎn)/分鐘常溫

離心 10min（或 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10min 后取上清再 4000

轉(zhuǎn)/分鐘離心 10min），取上清待測(cè)（取部分上清液于 90℃

以上沸水浴中反應(yīng) 5min 作為除非處理的粗酶液上清）。

2、血清（漿）或果汁樣本：取血清（漿）或果汁體積（mL）：

提取液體積（mL）為 1:4 或 1：9 的比例（例如取 0.2mL

血清（漿）或果汁加入 0.8mL 提取液，或者取 0.1mL 血

清（漿）或果汁加入 0.9mL 提取液），渦旋混勻抽提 1min；

8000 轉(zhuǎn)/分鐘常溫離心 10min（或 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10min

后取上清再 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10min），取上清待測(cè)（取

出部分上清液于 90℃以上沸水浴中反應(yīng) 5min 作為除非

處理的粗酶液上清）。

3、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：可用稱重法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法,詳情參考 注

意事項(xiàng) 。

八、注意事項(xiàng):

1、細(xì)菌或細(xì)胞樣本前處理：A:稱重法：提取時(shí)可以先取離心

管用萬(wàn)分之一天平稱重，再收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，

1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 5min 后棄上清，再次稱重，減去空離心

管重量，再按 2（mg）：1000（μL）或 1（mg）：1000（μL）

的比例加入提取液，超聲破碎（冰浴，功率 20%或 200W，

超聲 3s、間隔 10s，重復(fù) 30 次），8000 轉(zhuǎn)/分鐘 4℃離心

10min，取上清待測(cè)，結(jié)果按照組織計(jì)算方法計(jì)算；B：細(xì)

胞個(gè)數(shù)法：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；

按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：提取液體積為 500～1000:1

的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲

波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s、

間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000 轉(zhuǎn)/分鐘常溫離心 10min，取

上清待測(cè)

2、粗酶液提取完，吸出一部分在 90℃以上水浴中煮沸 5min，

取出流水冷卻，作為對(duì)照管煮沸的上清用。

3、試劑一在使用前先混勻使其分散后，再吸取進(jìn)行提取。

4、本實(shí)驗(yàn)組織/細(xì)胞樣本用試劑一提取很重要，提取后的粗酶

液除了測(cè)定蛋白以外，不能用于測(cè)定其他指標(biāo)，以防止產(chǎn)

生干擾。

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